基金项目：正交试验法优选鲜切太白黄精酒蒸炮制工艺

[基金项目]

陕西省教育厅重点实验室科研计划项目(No.14JS023)

1 仪器与试药

1.1 仪器

U-3010紫外可见分光光度仪(日本日立公司)；Sartorius 电子天平(1/10 万，德国)；ST-803型切片机(瑞安市赛特机电有限公司)；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DHG-9140电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司)。

1.2 试药

鸡头黄精药材采自陕西太白山，经陕西中医药大学药学院王继涛教授鉴定为百合科植物黄精Polygonatum sibiricum Red.的新鲜根茎。新鲜黄精除去须根，抢水洗，稍晾，切厚片，酒蒸。

葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110833-200904)；黄酒(浙江绍兴县第三酒厂，批号20141202)；硫酸、0.2%蒽酮-硫酸试液、乙醇等试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 黄精多糖的测定

2.1.1 对照品溶液的制备 取经105 ℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含无水葡萄糖0.33 mg)。

2.1.2 供试品溶液的制备 取60 ℃干燥至恒重的本品细粉约0.25 g，精密称定，置圆底烧瓶中，加80%乙醇150 mL，置水浴中加热回流1 h，趁热滤过。残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10 mL，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150 mL，置沸水浴中加热回流1 h，趁热滤过。残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10 mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取1 mL置10 mL具塞干燥试管中，照按2.1.3项下方法，自“加水至2.0 mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量(mg)，计算即得。

2.1.3 线性关系考察 精密量取对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，各加水至2.0 mL，摇匀。在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，摇匀，放冷后置水浴中保温10 min，取出，立即置冰水浴中冷却10 min，取出，以相应试剂为空白。照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在582 nm波长处测定吸光度。以浓度(X)为横坐标，吸光度(Y)为纵坐标作图，得回归方程：Y=7.518 1X+0.163 3，r=0.999 5。线性范围为0.016 2～0.195 0 mg。

2.1.4 精密度试验 取同一供试品溶液，按2.1.3项下方法显色后测定，重复测定6次，记录吸光度。结果吸光度RSD=0.04%，表明本方法精密度良好。

2.1.5 重复性试验 取同一样品6份，每份0.25 g，精密称定，按2.1.2项下方法制成供试品溶液，每份吸取1 mL，按2.1.3项下方法显色后测定，记录吸光度。结果RSD=2.10%，表明本方法重复性良好。

2.1.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按2.1.3项下方法显色后，分别在0、10、20、30、40 min时测定吸光度。结果RSD=0.48%，表明供试品溶液在40 min内基本稳定。

2.1.7 加样回收率试验 取已知黄精多糖含量的样品6份，每份0.25 g，精密称定，分别加入一定量葡萄糖对照品溶液，按照2.1.2项下方法制备并测定，计算回收率为98.69%，RSD=1.03%，表明本法回收率良好。结果见表1。

表1 加样回收率试验

2.2 水溶性浸出物测定

取供试品约2 g，精密称定，置250 mL锥形瓶中，精密加水100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(%)。

2.3 醇溶性浸出物测定

取供试品约2 g，精密称定，置250 mL的锥形瓶中，精密加稀乙醇100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(%)。

2.4 外观性状评分标准

参照2015版《中华人民共和国药典》一部黄精性状项下规定，确定评分。黑色，计1.0分；棕褐色，计0.8分；棕色，计0.5分。嚼之黏性足，微有酒香气，计1.0分；嚼之有黏性，酒香气若有若无，计0.8分；嚼之无黏性，无酒香气，计0.5分。味甜、无口舌麻木感，计1.0分；稍甜、稍有口舌麻木感，计0.8分；甜味淡、有口舌麻木感，计0.5分。

2.5 酒蒸太白黄精正交试验

在单因素考察和文献查阅的基础上，采用L9(34)正交试验考察蒸制时间(A)、加酒量(B)、润制时间(C)、焖制时间(D)4个因素，每个因素3个水平，以饮片外观性状、多糖、浸出物的综合评分为评价指标，优选太白黄精酒蒸工艺。因素水平见表2。

表2 因素水平表

综合评分标准：为客观反映酒蒸黄精工艺中各因素对黄精质量的影响，本试验将外观性状及黄精功能相关成分(黄精多糖)以及浸出物含量作为评价指标，采用综合评分法评定。因黄精多糖是黄精的主要有效成分，且为2015版《中华人民共和国药典》一部规定的黄精的指标成分，又因外观性状、浸出物含量也对黄精的质量评价具有重要意义，因而暂定综合评分=(外观性状评分/最高外观性状评分)×20+(黄精多糖含量/黄精多糖最高含量)×50+(水浸出物含量/水浸出物最高含量)×15+(醇浸出物含量/醇浸出物最高含量)×15。结果分别见表3和表4。

由极差R值分析可知，各因素作用主次顺序为ADBC，蒸制时间影响最大，焖制时间次之，其次是加酒量，最后是润制时间。最佳工艺为A2B3C1D2。方差分析结果显示，P值均小于0.01，4个因素均为主要影响因素。因而初步认为最佳炮制工艺：取黄精，加30%黄酒润6 h，蒸10 h，焖6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。

表3 正交试验设计表及结果(n=2)

表4 方差分析表

注：F 0.01(2，9)=8.02。

2.6 验证试验

按照上述最佳的炮制工艺，取黄精10 kg，平行制备3份黄精样品。取样测定蒸制品中黄精多糖的含量、浸出物含量，并对外观性状进行评分。见表5。

表5 酒黄精最佳炮制工艺验证试验

结果表明，确定的工艺操作简便，合理可控。

3 讨论

黄精由于含有大量的粘液质和糖分，在炮制过程中，除了一般的洁净处理外，要防止用水浸泡，以防有效成分流失。因此，药材的软化以焖润为宜。不管采用何种辅料炮制，都必须使辅料全部被吸尽，内无干心，以便最大限度地发挥药物的治疗作用[吉山花瑶]。

外观质量评价是传统意义上的中药饮片质量标准，同时是目前单一化学成分和化学部位不能替代的评价标准[3]，因此将其作为正交试验的指标之一?；凭嗵鞘腔凭闹饕┬С煞?，具有延缓衰老、降血糖、降血脂、调节免疫、防止动脉粥样硬化、抗肿瘤等药理作用[4-8]，故将其作为评价指标之一。

本试验仅从外观性状、化学成分和浸出物的角度优选太白黄精酒蒸炮制工艺，在以后的研究中，还应该采用联合化学成分、指纹图谱、药效等多指标来综合评价炮制工艺，以便更好地适用于临床。

总结：

鲜切太白黄精最佳酒蒸工艺为取黄精，加30%黄酒，润制6 h，蒸制14 h，焖制6 h，取出，切4 mm厚片，干燥。结论：优选得到的鲜切太白黄精酒蒸炮制工艺稳定，可为其产地加工炮制一体化技术提供试验依据。

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